關于組織樣本以及細胞提取液樣本添加蛋白酶抑制劑的問題
1. ELISA實驗中為什么在制備組織勻漿和細胞提取液時建議使用蛋白酶抑制劑?
在制備組織勻漿或細胞提取液時,組織或細胞內源性蛋白酶(如絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等)會被釋放,可能導致以下問題:
① 靶蛋白降解:?目的蛋白會被內源性蛋白酶降解,導致假陰性結果。
② 蛋白片段干擾:?目的蛋白降解后產生的短肽可能會非特異性結合ELISA抗體,導致背景OD值升高。
如果不使用蛋白酶抑制劑,可能會導致:
① 假陰性結果:?降解導致靶蛋白的量減少,無法正確檢測;
② 數(shù)據波動大、重復性差:樣本中的蛋白降解程度不同,導致數(shù)據不一致;
③ 背景OD值升高:降解產物與抗體結合,產生